原代細胞是從目標組織或器官分離出來的異質細胞群，包含了多種細胞類型，其中既有終末分化細胞，也包括干細胞、祖細胞以及其他一些仍具有分裂能力的細胞。相關閱讀：《什么是原代細胞？一文為您解讀》

（A）原代細胞直接來自被工程化的組織。（B）自從小鼠胚胎干細胞顯示出分化成各種器官類型的潛力以來，胚胎干細胞一直受到研究。（C）成體細胞可以從組織中提取，并通過遺傳轉錄因子誘導成干細胞狀態，從而重置細胞的表觀遺傳組織。（D）每種組織似乎都有駐留干細胞，有助于修復該組織。這些成體干細胞可以被分離并用于形成類似的組織。（圖片來源sciencedirect）

  原代細胞培養是指從組織中分離出細胞在體外進行早期傳代培養（通常在5代以內，更嚴格的會在3代以內）。通過對原代細胞培養，科研者可以更好研究細胞生命過程、癌細胞病變、細胞工程等問題，因為它提供更接近體內環境細胞模型。

  細胞為什么要進行傳代培養？

  當細胞培養瓶中形成致密單層時，它們基本上已飽和。為了使細胞繼續生長并增加數量，必須進行傳代（再培養）。懸浮細胞可以直接分瓶，而貼壁細胞需要經過消化后才能分瓶。

  貼壁細胞的消化法傳代

  材料和試劑

  細胞：貼壁細胞

  試劑：0.25%胰酶、1640培養基（含10%小牛血清）

  儀器和器材：倒置顯微鏡、培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

  操作步驟：

  步驟1、吸除培養瓶內的舊培養液。

  步驟2、向瓶內加入少許胰蛋白酶和EDTA混合液，以能覆滿瓶底為限。

  步驟3、將培養瓶置于溫箱中2~5分鐘，當細胞質回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。

  步驟4、吸除消化液，向瓶內注入數毫升Hanks液，輕輕轉動培養瓶，把殘余消化液沖掉。

  注意：加Hanks液沖洗細胞時，動作要輕，以免把已松動的細胞沖掉流失。如用胰蛋白酶液單獨消化，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養液。

  步驟5、用吸管吸取營養液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。注意：吹打細胞力度要適中，對一些脆弱細胞，建議使用細胞刮刀輕輕刮下細胞，避免吹打帶來損傷。

  步驟6、計數板計數后，把細胞懸液分成等份分裝入數個培養瓶中，置溫箱中培養。

  實驗注意事項：

  1.預熱所有試劑: 將胰蛋白酶/EDTA、Hanks液或培養基預熱至37℃，可以提高消化效率，并減少對細胞的冷刺激。

  2.無菌操作: 所有操作都必須在無菌條件下進行，以防止污染。

  3.優化消化時間: 不同的細胞類型對胰蛋白酶/EDTA的敏感性不同，需要根據實際情況調整消化時間。過短的消化時間會導致細胞無法完全脫離瓶壁，而過長的消化時間則會損傷細胞。

  懸浮細胞的傳代

  試劑：培養基、平衡鹽溶液

  儀器和器材：離心管、吸管或移液器、新的細胞培養瓶/皿、計數板、凍存管

  操作步驟：

  直接法傳代

  步驟1、輕輕混勻細胞懸液：不要劇烈搖晃，以免損傷細胞。可以使用血清移液管輕輕吹打幾次，使細胞懸浮均勻。

  步驟2、取少量細胞懸液進行計數：使用計數板或自動化細胞計數器對細胞進行計數，確定細胞密度和活力。

  步驟3、根據所需的細胞密度和傳代比例，計算分裝體積：例如，如果需要將細胞密度調整為1x10^5cells/mL，則需要根據細胞計數結果和分裝后的總體積計算需要轉移的細胞懸液的體積。

  步驟4、分裝細胞懸液：將計算好的體積的細胞懸液轉移到新的培養瓶中，并加入新鮮的培養基至所需的體積。

  步驟5、置于培養箱中培養：將分裝好的細胞置于37℃、5%CO2的培養箱中進行培養。

  離心法傳代

  步驟1、將細胞連同培養液一并轉移到離心管內，離心800-1000rpm，5分鐘。

  步驟2、去除上清，加新的培養液到離心管內，用吸管吹打使之形成細胞懸液。

  步驟3、將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養瓶中，置37℃培養箱中培養。

  上述 是細胞傳代幾種步驟，科研者可以成功的進行細胞傳代培養，為各種實驗和研究提供穩定可靠的細胞來源。